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凍干機原理

藥材凍干機制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法

發布時間:2021-08-18 16:21 人氣:

藥材凍干機制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法!真空冷凍干燥技術簡稱凍干技術,是一項對食品護色、保鮮、保質的高新加工技術。目前廣泛用于果蔬、肉禽、水產、調味品、方便食品及名優特產等干燥,可達到保持食品原有的色、香、味、形、新鮮度不變的目的,且復水性特好,成品便于貯存和運輸,費用降低,保存期延長。在干燥蜂皇漿、人參、龜、鱉、蚯蚓等營養保健品,采用真空冷凍干燥工藝,更使人們相信該營養品純真自然。

 

真空凍干機制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法,其特征在于,包括如下步驟:

步驟一、蚯蚓粗粉的制備:將活蚯蚓,饑餓一天,自然吐凈泥沙,洗滌,而后在溫度介于2035℃的通風條件干燥并制成粉碎,通過100200目篩制成蚯蚓粗粉;

步驟二、粗酶溶液的制備:取蚯蚓粗粉用2倍體積的0.1mol/L,pH為7.8的磷酸緩沖液PBS勻漿,加0.1mol/LNaCl溶液,置于4℃冰箱內過夜,然后以10000r/min,4℃離心15min,棄沉淀,取上清;上清液于50℃水浴保溫40min,流水冷卻,再8000r/min,4℃離心10min,取上清,在上清液中加硫酸銨達30%飽和度,靜置3小時,再8000r/min,4℃離心10min;收集上清液再加硫酸銨達70%飽和度,靜置3小時,再8000r/min,4℃離心10min,收集沉淀;將沉淀溶于上述緩沖液中,對上述緩沖液以載留5KD分子量的透析袋透析過夜去鹽,再將透析液8000r/min,4℃離心10min,取上清液即為蚯蚓纖溶酶粗酶溶液;

步驟三、粗酶的純化:將蚯蚓纖溶酶粗酶溶液過Sephadex G75凝膠層析,上柱前預先用0.02mol/L,pH為7.8的磷酸緩沖液平衡,上柱后用上述緩沖液洗脫至在280nm波長無光吸收,洗脫液出現2個蛋白峰,其中酶活性峰與第1個蛋白峰重疊,收集重疊部分的酶液,過DEAECellulose A52離子交換柱,過柱前先用0.05mol/L,pH為7.8的PBS平衡;然后用含00.5mol/L NaCl的PBS離子強度線性梯度洗脫,洗脫液出現3個蛋白峰,酶活性峰與蛋白峰第3峰重疊,其余2個蛋白峰基本無酶活性,收集活性部分即為蚯蚓纖溶酶純酶;

步驟四、蚯蚓纖溶酶的修飾:加入蚯蚓纖溶酶純酶和活化的PEG到15mL,pH9.2,0.1mol/L的硼酸緩沖液中,純酶與PEG的重量比是1:50,在30℃下,保溫反應1小時,反應物對0.1mol/L,pH7.3的磷酸緩沖液透析過夜,透析液再以10000r/min,4℃離心l0min, 取上清液過柱Sephadex G75,收集活性成分,即為蚯蚓纖溶酶修飾酶;

 

步驟五、蚯蚓纖溶酶凍干粉的制備:將蚯蚓纖溶酶修飾酶裝在樣品盤里,料厚不超過8mm,放進真空冷凍干燥機設備干燥室內進行凍干,于-35℃冷凍12小時,然后在5pa的真空度下,升溫至30℃,干燥12小時;繼續升溫至40℃,真空干燥14小時,得到蚯蚓纖溶酶修飾酶的凍干粉,其含水量為7.0%,蛋白含量為68%,酶活力為1700U/mg。

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